基于重组IBDV VP3蛋白的免疫磁珠间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

摘要：

本研究旨在毕赤酵母中表达鸡传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的VP3蛋白,以重组VP3蛋白作为包被抗原建立IBDV血清抗体免疫磁珠间接ELISA检测方法并进行初步应用.利用毕赤酵母表达系统获得约为39 ku的重组VP3蛋白,Western-blotting检测表明,重组VP3蛋白具有良好的特异性和反应原性.免疫磁珠间接ELISA的最佳反应条件:磁珠和抗原偶联的缓冲液是50 mmol/L MES(pH 8.0),偶联时间为3h,抗原加入量为95μg,抗原与羧基磁珠最大偶联量为80 μg.待检血清和酶标二抗的稀释度分别为1∶1 600和1∶4 000,血清孵育时间为30 min,酶标二抗孵育时间为20 min.在该优化条件下,阴性、阳性临界值判定标准为0.134.特异性试验显示,对抗AIV、IBV、MDV、NDV阳性血清检测结果均为阴性.敏感性试验显示,本试验所建立的检测方法敏感性高于商品化IBDV血清抗体检测试剂盒.重复性试验显示,批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.8％和5.9％.稳定性试验结果显示变异系数小于7％.用建立的检测方法和商品化IBDV血清抗体检测试剂盒同时检测50份血清,结果显示两种检测方法的相对敏感性为94.6％,相对特异性为92.3％,符合率为94.0％.本试验建立的检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好、稳定性高特点,为其应用于临床IBDV血清抗体的检测奠定了基础.

关键词：免疫磁珠间接ELISA、IBDV抗体检测、IBDV VP3蛋白、毕赤酵母表达系统

所属期刊栏目：49

分类号：S852.659.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十二五”国家科技计划农村领域项目2015BAD12B01-4

在线出版日期：2019-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：678-686