牛轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

摘要：

为建立检测牛轮状病毒(BRV)的双抗体夹心ELISA方法,本研究制备了家兔抗牛轮状病毒VP6蛋白的多克隆抗体,并以VP6蛋白为免疫原通过细胞融合和筛选获得了5株分泌抗BRV VP6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为5C9、3G10、6E11、4D10和5A3.Western-blot和间接免疫荧光试验结果均表明,5株单抗与BRV具有良好的亲和性.以纯化的家兔抗BRV VP6蛋白多抗为捕获抗体,以4D10单抗为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA方法.敏感性试验表明,该方法对BRV的最低检出量(TCID50)为9.884×104/mL.特异性试验结果表明,与PRV、PEDV、BPV及TGEV均无交叉反应.板间和板内重复性试验结果显示,该方法具有良好的重复性.对95份临床样品进行检测,与RT-PCR方法比较,符合率为100％.综上,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于BRV的快速检测.

关键词：牛轮状病毒、VP6蛋白、单克隆抗体、双抗体夹心ELISA

所属期刊栏目：48

分类号：S852.659.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500904

在线出版日期：2018-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1352-1357