猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌二重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

为建立一种快速、准确检测猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌二重TaqMan荧光定量PCR方法,本研究根据猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌16S rRNA基因保守序列设计种特异性引物及探针,并优化反应条件,建立了检测猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌的二重TaqMan荧光定量PCR检测方法.结果表明,所建方法特异性良好,与其他25种常见细菌均无交叉反应.猪丹毒杆菌检测在2.07×108～2.07×103 copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低可以检测到2.07×102 copies/μL的标准品阳性质粒,批内和批间变异系数均小于3％:溶血性曼氏杆菌检测在1.07×108～1.07×103 copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低可以检测到1.07 × 102 copies/μL的标准品阳性质粒,批内和批间变异系数均小于3％.应用建立的二重荧光定量方法和普通荧光定量方法对47份临床样品进行检测,符合率为100％.本研究结果表明,所建立的方法可用于猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌感染的高通量快速诊断以及猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌的快速鉴定及定量分析.

关键词：猪丹毒杆菌、溶血性曼氏杆菌、TaqMan荧光定量PCR、诊断

所属期刊栏目：38

分类号：S852.615(动物医学（兽医学）)

资助基金：云南省生猪产业技术体系建设项目;云南省现代农业奶牛产业技术体系建设云财农号

在线出版日期：2017-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1027-1031