兔出血症病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与应用

摘要：

为建立一种可视化的兔出血症病毒RT-LAMP检测方法,根据兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)的主要结构蛋白VP60基因的序列设计合成4条特异性引物,以重组pMD 19-T-VP60质粒为模板,通过反应条件与反应体系优化,建立RHDV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定RT-LAMP 对RHDV的最低检测限,并与普通RT-PCR进行比较.结果显示,该RT-LAMP的最佳反应温度为62℃,反应时间为40 min,对RHDV的最低检测限为50 copies/μL,常规RT-PCR的检测限为5×103copies/μL,表明建立的RT-LAMP的灵敏度显著高于常规RT-PCR.建立的RT-LAMP的全部反应可在lh内完成;反应结束后加入荧光染料EtBr可肉眼判定粉色为阳性,而棕色则为阴性,且与兔巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌、无乳链球菌及肺炎克雷伯菌无交叉反应.上述结果表明,建立的RT-LAMP简便、快速、灵敏、特异,且不需昂贵仪器设备,适合在基层推广应用.

关键词：兔出血症病毒、RT-LAMP、RT-PCR、VP60基因

所属期刊栏目：47

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技支撑计划No.2016NZ0002

在线出版日期：2017-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：687-693