禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白多克隆抗体的制备及其在乳酸乳球菌中的表达

摘要：

将编码禽戊型肝炎病毒(aHEV)衣壳蛋白的ORF2基因片段克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET-30a(+)-ORF2.质粒经鉴定正确后转化入大肠杆菌Rosseta中筛选阳性菌,阳性菌经IPTG诱导后检测目的蛋白表达情况.用表达的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,应用间接ELISA检测抗体效价.将衣壳蛋白主要抗原区域ORF2△250(251～606 aa)基因片段克隆入乳酸菌表达载体pTX8048中获得阳性质粒pTX8048-ORF2△250,质粒电转化入宿主菌Lactococcus lactis NZ9000中筛选阳性菌pTX8048-ORF2△250/ L.lactis NZ9000.阳性菌经Nisin诱导后采用Western-blot检测目的蛋白表达情况.结果表明,aHEV衣壳蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,制备的多克隆抗体效价为1∶216.重组菌pTX8048-ORF2△250/L.lactis NZ9000经Nisin诱导后,Western-blot检测到约55 ku的目的蛋白.上述研究结果将为鸡戊型肝炎乳酸菌疫苗研究提供参考.

关键词：禽戊型肝炎病毒、ORF2、多克隆抗体、乳酸乳球菌

所属期刊栏目：47

分类号：S852.659.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：黑龙江省自然科学基金;黑龙江省博士后启动基金

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：197-201