口疮病毒B2L蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

摘要：

将口疮病毒(orf virus,ORFV)ORFV B2L蛋白基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组B2L蛋白的诱导表达;对纯化复性后的B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测血清ORFV抗体水平的间接ELISA,并进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后对临床样品进行检测.结果,原核表达出42 ku的重组B2L蛋白.Western-blot结果表明,重组蛋白具有良好的特异性和抗原反应性.最佳优化反应条件为:抗原包被量每孔600 ng,血清以1:200倍稀释作用lh,酶标二抗以1∶5 000倍稀释作用30 min,TMB显色时间为10 min.在该优化条件下,D450≥0.342为阳性,D450＜0.342为阴性;特异性试验表明,此间接ELISA对其他阳性血清的检测结果为阴性;对121份阳性血清进行检测,敏感性为99.2％;重复性试验表明,批内和批间D450值的变异系数分别在1.81％～6.23％和1.70％～7.45％之间.本试验建立的体系对临床上676份山羊血清样品进行检测,阳性率为99.4％.上述结果表明,本研究建立的间接ELISA可用于ORFV抗体的检测.

关键词：山羊、绵羊、口疮病毒、B2L蛋白、原核表达、间接ELISA

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：陕西省农业科技创新与攻关项目2016NY-092;陕西省重点产业创新链项目2016KTZDNY02-06

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：150-156