犬细小病毒的新型原液荧光定量PCR方法的建立

摘要：

为建立一种不提取病毒DNA,直接采用样本上清液检测犬细小病毒(CPV)的TaqMan荧光定量PCR方法,通过扩增CPV NS基因部分片段构建重组质粒,建立TaqMan荧光定量PCR方法;对建立的方法进行反应条件、特异性、敏感性的检测;通过建立的方法对核酸荧光定量PCR和原液荧光定量PCR进行对比;最后对临床中疑似的CPV病例进行检测.结果显示,建立的方法特异性好,对犬常见病毒无扩增.该方法检测的灵敏度达101 copies/μL,该方法的批内变异系数为0.09％～1.30％,批间变异系数为0.57％～0.94％,重复性良好.核酸荧光定量PCR和原液荧光定量PCR的最低检测浓度均可以达到101copies/μL,且原液荧光定量PCR的产物浓度约为核酸荧光定量PCR的7倍,提示核酸在提取过程中有大量的损耗.对187份临床病料进行检测,建立的方法共检出128份阳性,与普通PCR和胶体金快速检测板的阳性符合率均为100％,核酸法与原液法的符合率为100％.因此,本试验建立的CPV病料原液TaqMan荧光定量PCR方法与普通PCR和胶体金快速检测板相比,具有阳性检出率更高、准确率更好的特点.

关键词：犬细小病毒、TaqMan荧光定量PCR、样品上清

所属期刊栏目：47

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：公益性行业农业科研专项;全军医学科技青年培育项目;成都大熊猫繁育研究基金

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：135-142