猪四种病毒性腹泻病原多重PCR检测方法的建立及应用

摘要：

分别以猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因、猪轮状病毒(PoRV)VP6基因、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因、猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV) Npro基因为靶基因,参照GenBank上登录的基因序列,利用DNAStar和Oligo7软件设计了4对引物.采用PCR分别扩增各病毒基因,并克隆至pMD18-T载体,获得4个阳性重组质粒.以重组质粒为模板,进行多重PCR方法的优化.特异性试验检测可分别扩增出相应的病毒基因片段;敏感性试验结果显示,检测PEDV、TGEV、PoRV及BVDV质粒的最低拷贝数分别为730 copies/μL、547 copies/μL、6.47×103 copies/μL、705 copies/μL.应用该方法对猪场44份猪腹泻样品进行检测,结果检出15份PEDV样品,3份TGEV样品,2份BVDV样品,其中PEDV与TGEV混合感染样品2份,TGEV与BVDV混合感染样品1份.随机抽取其中2份PEDV阳性样品进行病毒分离,病毒经细胞传3代以上PCR检测均为阳性,对PCR产物测序证实为PEDV.结果表明,本研究建立的多重PCR方法具有快速、简便、特异性强、敏感度高的特点,能够对PEDV、PoRV、TGEV和BVDV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断.

关键词：猪病毒性腹泻病原、多重PCR检测技术、PEDV、TGEV、PoRV、BVDV

所属期刊栏目：46

分类号：S852.651(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技攻关计划;国家科技攻关计划;上海市扬帆计划

在线出版日期：2016-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：972-978