抗犬细小病毒单链抗体的制备

摘要：

提取分泌犬细小病毒的杂交瘤细胞株3H9的总RNA,反转录获得cDNA链,并以此为模板扩增重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因,利用SOE PCR方法连接VH基因和VL基因,同时引入(Gly4Ser)3连接肽序列,扩增得到大小为765 bp的单链抗体(ScFv)基因.将ScFv基因连接至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组质粒pET-32a-ScFv,转化至BL21(DE3)感受态细胞,并在37℃条件下进行IPTG诱导表达,得到融合蛋白.经SDS-PAGE分析大小约为46 ku,与预期结果相符.经Western-blotting鉴定,该蛋白能被抗His标签的单克隆抗体特异性识别.间接ELISA试验以及中和试验结果表明,ScFv能够与犬细小病毒结合,具有中和犬细小病毒的活性.本试验成功构建了抗犬细小病毒单链抗体,并获得了高效表达.

关键词：犬细小病毒、单链抗体、原核表达、活性鉴定

所属期刊栏目：46

分类号：S852.165(动物医学（兽医学）)

资助基金：公益性行业农业科研专项201303024

在线出版日期：2016-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：959-964