猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化方法的建立

摘要：

采用差速离心、膜包超滤浓缩和Sepharose 4 Fast Flow (4FF)凝胶层析相结合的策略纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),建立了一种温和纯化PRRSV的方法.通过SDS-PAGE、Western-blot和检测病毒含量、蛋白含量等方法分析纯化效果.用纯化后的病毒免疫BALB/c雌性小鼠,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测其免疫原性,并与超速离心沉淀病毒的纯化方法相比较,评估纯化病毒的免疫效果.结果显示,4FF纯化后的病毒TCID5o提高了50倍,与超离方法相比,4FF纯化法将病毒原液杂蛋白的去除比率由97.51％提高到99.68％,SDS-PAGE显示未见明显杂蛋白条带,IPMA结果显示4FF纯化病毒的免疫原性较好,特异性较强,消除了免疫后小鼠血清与Marc-145细胞蛋白的非特异性反应.结果表明,4FF纯化方法优于超离纯化方法,前者的建立为制备单克隆抗体和规模化纯化PRRSV疫苗的工艺开发奠定基础.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、纯化、Sepharose 4FF层析

所属期刊栏目：46

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;河南省农科院科研发展专项

在线出版日期：2016-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：568-572