肠炎沙门菌鞭毛蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备

摘要：

利用PCR技术成功扩增到了肠炎沙门菌鞭毛蛋白fliC基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-3 2a(+)-fliC.将pET-32a(+)-fliC转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,并在30℃下用终浓度为1 mmol/L IPTG进行诱导表达9h.表达的重组蛋白通过镍离子亲和层析和分子筛的方法进行纯化,获得的蛋白用SDS-PAGE方法进行分析.对纯化的重组蛋白进行定量和内毒素测定后,用其免疫SPF鸡,制备超免疫血清.纯化的FliC蛋白与其受体之间的相互作用通过流式细胞仪进行分析.结果显示,成功扩增到了长度为1518bp的全长fliC基因,该基因编码的蛋白在30℃下以可溶性形式表达,经过镍离子亲和层析与分子筛的方法获得的FliC蛋白的纯度高,其内毒素的含量低于0.5 EU/mL,并能够结合该蛋白在细胞上的受体.用纯化的重组蛋白免疫鸡获得的阳性血清的效价为1∶12 800.上述结果为进一步研究FliC蛋白的免疫学功能奠定了基础.

关键词：肠炎沙门菌、鞭毛蛋白、原核表达、阳性血清、生物活性

所属期刊栏目：46

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项0302015005

在线出版日期：2016-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：8-12