猪腺病毒3型SYBR Green Ⅱ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为建立一种针对猪腺病毒3型(PADV3)的检测方法,根据PADV3 E1B基因保守序列设计1对引物,建立了检测PADV3的SYBR GreenⅡ实时荧光定量PCR.结果显示,该方法不能对猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪博卡病毒、猪传染性胃肠炎、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、大肠杆菌、猪链球菌2型检测到荧光信号,特异性好;检测PADV3时在3.7×102～3.7×109 copies/μL范围内具有良好的线性关系,其扩增相关系数为0.999,扩增产物的熔解曲线仅出现单一特异峰,无引物二聚体,熔解温度为90.5℃;该方法组内变异系数为0.17％～1.23％,组间变异系数为0.73％～2.23％,重复性较好.应用该方法对临床56份腹泻粪便检测,检出11份阳性,且与常规PCR检测方法的阳性符合率为100％.上述结果表明,建立的实时荧光定量PCR为PADV3感染的早期诊断、流行病学调查奠定了技术基础.

关键词：猪腺病毒3型、SYBR Green Ⅱ、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：45

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技支撑计划;国家国际科技合作专项基金;长江学者和创新团队发展计划

在线出版日期：2015-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1148-1152