柔嫩艾美耳球虫AMA1蛋白多克隆抗体的制备及在乳酸乳球菌中的表达

摘要：

将柔嫩艾美耳球虫子孢子顶膜抗原AMA1胞外域基因片段(EtAMA1)克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET-30a(+)-EtAMA1.质粒经鉴定正确后转化入大肠杆菌中筛选阳性菌,阳性菌经IPTG诱导后采用Western-blot检测目的蛋白的表达情况.用表达的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.应用间接ELISA测定抗体效价,并采用Western-blot检测抗体特异性.将EtAMA1克隆入乳酸菌表达载体pTX8048中构建阳性质粒pTX8048-EtAMA1,质粒电转化入宿主菌乳酸乳球菌(Lacto-coccus lactis)NZ9000中筛选阳性菌pTX8048-EtAMA1-L.lactis NZ9000.阳性菌经Nisin诱导后采用Western-blot检测目的蛋白的表达情况.结果表明,EtAMA1在大肠杆菌中以包涵体形式表达.多克隆抗体的效价为218.Western-blot检测证实,制备的抗体可与子孢子反应.重组菌pTX8048-EtAMA1-L.lac-tis NZ9000经Nisin诱导后,采用Western-blot检测到约61 ku的目的蛋白.上述研究结果为基于EtAMA1的鸡球虫病乳酸菌口服疫苗的研制提供了重要参考.

关键词：柔嫩艾美耳球虫、顶膜抗原、多克隆抗体、乳酸乳球菌

所属期刊栏目：45

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：黑龙江省自然科学基金;黑龙江省博士后启动基金

在线出版日期：2015-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1130-1135