猪肺炎支原体P97基因重组腺病毒的构建及其免疫原性

摘要：

采用PCR扩增了猪肺炎支原体(Mhp)R659株黏附因子P97基因,测定了其核苷酸序列,并将其克隆至穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA上.在脂质体介导下将Pac Ⅰ酶线性化的重组穿梭质粒pacAd-P97和腺病毒骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染AD-293细胞,包装出重组腺病毒Ad-P97,用RT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光试验检测重组P97蛋白在AD-293和PK15细胞中的表达.之后,用Ad-P97抗血清检测Mhp对宿主细胞的黏附作用以及Ad-P97在仔猪体内的免疫应答反应.结果显示,P97基因由3 339个核苷酸组成,共编码1 113个氨基酸,其核苷酸序列高度保守;重组P97蛋白可在Ad-P97感染的AD-293细胞和PK15细胞中高效表达,但Ad-P97不能在PK15细胞中增殖并引起细胞病变;Ad-P97具有良好的免疫原性,能抑制Mhp对PK15细胞的黏附作用,诱导免疫仔猪产生Mhp凝集抗体.上述结果为进一步研制安全、高效的Mhp重组疫苗奠定了基础.

关键词：猪肺炎支原体、黏附因子、重组腺病毒载体、疫苗

所属期刊栏目：45

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省科技计划0809035

在线出版日期：2015-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1114-1121