H1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及其在浙江省的应用

摘要：

利用RT-PCR扩增了猪流感病毒分离株A/ Swine/Zhejiang/103 /2002(H1N1) HA1基因,并将其克隆至pFastBacHTA杆状病毒转移载体.将筛选的阳性重组转移载体pFastBacHTA-HA1转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,构建重组转座子rBacmid-HA1.之后转染Sf9昆虫细胞制备rBV-HA1重组杆状病毒.SDS-PAGE分析显示,重组表达的HA1蛋白的分子质量约为45 ku.Western-blot结果显示,该HA1蛋白能与H1亚型猪流感阳性血清特异性结合,具有良好的抗原活性.利用镍柱纯化后的HA1蛋白作为包被抗原,建立了H1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA检测方法,通过对各种条件进行优化,确定了最佳反应体系.该方法与多种猪病毒阳性血清无交叉反应性,与HI方法的符合率为92.4％,与IDEXX进口试剂盒的符合率为94.6％.用该方法对2014年从浙江省规模化猪场采集的猪血清进行检测,阳性率为17.4％(589/3 379).该方法的建立为浙江省猪流感的监测及防控提供了重要检测工具.

关键词：猪流感病毒、血凝素抗原、杆状病毒、间接ELISA、抗体检测

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分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划项目2010BAD04B00;浙江大学自主科研计划项目2015FZA6017

在线出版日期：2015-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1101-1107