鸡PrP基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达

摘要：

为构建鸡PrP基因的真核表达载体,并通过毕赤酵母表达系统获得鸡朊蛋白(ChPrP),根据毕赤酵母GS115的密码子偏好性、G+C含量等特点对目的基因PrP(25～248)进行密码子优化与基因合成,同时以特异性引物扩增获得天然未经密码子优化的目的片段,之后将两种目的片段分别连接于pPIC9K表达载体并转化至毕赤酵母GS115中,经PCR,选择培养基MM、MD方法鉴定表型后以甲醇进行诱导获得目的蛋白,最后以SDS-PAGE检测蛋白表达.结果显示,经PCR及双酶切鉴定,成功构建了真核表达重组载体pPIC9K-PrP(25～248),并在毕赤酵母GS115中获得鸡朊蛋白,其与未经密码子优化的目的蛋白相比,具有更高的表达量.本研究通过毕赤酵母表达系统成功获得了鸡朊蛋白,为后续研究奠定了基础,也通过密码子优化前后蛋白表达量比对,再一次证实毕赤酵母具有较高的密码子偏好性.

关键词：鸡朊蛋白、pPIC9K、毕赤酵母GS115、真核表达

所属期刊栏目：45

分类号：S852.659.7(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;甘肃省自然科学基金研究项目

在线出版日期：2015-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：734-739