胸膜肺炎放线杆菌抗体ApxⅣ-Dot-PPA-ELISA检测方法的建立

摘要：

本研究构建了胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素ⅣA(ApxⅣA)的原核表达质粒pET-28a(+)-Apx Ⅳ,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中成功表达出分子质量约为48 ku的ApxⅣ蛋白,经Western-blot分析表明该重组ApxⅣ蛋白具有反应原性.试验进一步用纯化的重组ApxⅣ蛋白作为抗原,建立了胸膜肺炎放线杆菌抗体的Dot-PPA-ELISA检测方法,该方法诊断膜片上点样ApxⅣ抗原质量为0.737 μg,该方法检测灵敏度高,可检测到胸膜肺炎放线杆菌标准阳性血清IgG的最低含量为8.374×10-9g;检测特异性好,不与副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、猪链球菌2型、多杀性巴氏杆菌、日本脑炎病毒的阳性血清发生交叉反应.应用建立的诊断方法对446份临床血清样品进行检测,胸膜肺炎放线杆菌抗体的阳性检出率为25.37％.结果表明,该方法具有操作方便、灵敏、结果易于判读等优点,可应用于猪场猪传染性胸膜肺炎的血清学诊断.

关键词：胸膜肺炎放线杆菌、ApxⅣ、表达、Dot-PPA-ELISA

所属期刊栏目：45

分类号：S852.619(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技支撑计划项目2013NZ0056

在线出版日期：2015-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：633-638