致病性沙门菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

为建立一种灵敏、特异、快速地检测食品中致病性沙门菌的方法,针对沙门菌致病性菌株特有的invA基因设计引物,PCR扩增目的片段,构建重组质粒pMD19-T-inv285,将其作为标准品进行real-timePCR反应体系的优化和标准曲线的绘制,并进行灵敏度、特异性及稳定性检测;同时用该方法对90份肉品样品进行检测.结果显示,建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线方程为y=-3.397 1 x+27.313,相关系数r2=0.999 6.该方法的灵敏度为5×10° copies/μL,是普通PCR(5×102 copies/μL)的100倍.对10种常见食源性细菌的检测结果均为阴性;组内和组间重复试验的变异系数均低于1％.对90份肉品样品的检出率(6/90,6.67％)显著高于快速MALDI-TOF-MS法和传统的细菌分离鉴定方法(均为3/90,3.33％).结果表明,本试验建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR灵敏度高,且特异、稳定,适用于食品中致病性沙门菌的快速检测.

关键词：沙门菌、实时荧光定量PCR、MALDI-TOF-MS

所属期刊栏目：45

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;甘肃农业大学伏羲杰出人才项目

在线出版日期：2015-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：270-274