牛支原体P48蛋白的表达及间接血凝检测方法的建立与应用

摘要：

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66 ku的重组P48蛋白.将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体抗体的间接血凝试验.重组P48蛋白致敏红细胞的最佳质量浓度是20～40 μg/mL,牛支原体超免疫血清抗体效价达1∶2 048～1∶4 096.该方法对牛肺疫、牛巴氏杆菌病、牛病毒性腹泻病、布氏杆菌病、结核病、口蹄疫、牛生殖道支原体感染、里奇氏支原体感染、大肠杆菌病阳性血清的检测结果均为阴性.该方法的特异性为100％,敏感性为93.33％.与国外商品化的牛支原体ELISA试剂盒相比,平均符合率为96.15％.对833份田间血清和1 084份乳清进行检测,阳性率分别是15.37％和19.56％.结果表明,该方法敏感性高、特异性强和重复性好,可用于牛支原体抗体水平检测、牛支原体病的辅助诊断和流行病学调查.

关键词：牛支原体、重组P48蛋白、可溶性表达、间接血凝试验、抗体检测

所属期刊栏目：45

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：甘肃省科技支撑计划项目1204NKCA071;兰州市城关区科技计划项目2012-2-1

在线出版日期：2015-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：241-246