副猪嗜血杆菌不同血清型稳定表达蛋白的筛选及间接ELISA检测方法的建立
为了建立一种能够检测不同血清型副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA,选用了在4、5、12型副猪嗜血杆菌中稳定表达的3种蛋白经原核表达后作为候选抗原和全菌裂解物同时包被酶标板,对临床猪血清进行副猪嗜血杆菌抗体检测,发现以锰依赖的超氧化物歧化酶(MSD)作为包被抗原得到的结果最接近用副猪嗜血杆菌全菌裂解物进行ELISA检测的结果,故确定以MSD蛋白为抗原建立间接ELISA.通过方阵滴定对ELISA反应条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:包被抗原的质量浓度为1.5 μg/mL,4℃过夜;50g/L脱脂奶粉溶液37℃封闭2h;血清稀释度1∶160,37℃作用90 min;酶标二抗的稀释度为1∶15 000,37℃作用45 min;底物显色时间为37℃ 6 min.抗体临界值D450nm≥0.245 1判为阳性,D450nm＜0.208 3判为阴性,介于两者之间为可疑.特异性和重复性试验证明,该方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒、红斑丹毒丝菌、马链球菌、猪链球菌、大肠杆菌、肠炎沙门菌血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性较好.用建立的间接ELISA对114份临床血清进行检测,与4、5、12型全菌裂解物的ELISA检测结果比较,阳性符合率分别为80.77％、80.00％和90.00％.结果表明,建立的间接ELISA可被用于4、5、12型副猪嗜血杆菌的抗体检测和流行病学调查.
副猪嗜血杆菌、MSD重组蛋白、间接ELISA
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S852.612(动物医学（兽医学）)
公益性行业农业科研专项201203039
2015-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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