微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达

摘要：

为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中.对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上.重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达.结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础.

关键词：微小隐孢子虫、类钙调蛋白基因、真核表达质粒

所属期刊栏目：44

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2014-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：485-491