日本脑炎病毒基因Ⅰ型与Ⅲ型复合RT-PCR鉴别方法的建立

摘要：

为建立一种简单快捷的鉴别日本脑炎病毒(JEV)基因Ⅰ型与基因Ⅲ型的方法,根据基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的保守序列,分别设计合成了针对基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV的RT-PCR引物P1、P3和P2、P3,以JEV SA14-14-2和CZ1株的核酸提取液为模板,通过对反应体系及条件的优化,建立了一种可快速鉴别JEV基因Ⅰ型与Ⅲ型的复合RT-PCR方法,并用建立的方法对27份临床样品进行了检测.结果显示,以设计合成的引物进行复合RT-PCR扩增,得到与基因Ⅰ型JEV预期相符的381 bp的特异性条带,得到与基因Ⅲ型JEV预期相符的550 bp的特异性条带,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病病毒核酸的扩增结果均为阴性.敏感性试验结果显示,该方法对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的最小检出量分别为1.0 pg/μL和10 pg/μL.利用建立的复合RT-PCR方法对27份临床样品进行检测,结果5份为基因Ⅰ型,2份为Ⅲ型,与核苷酸序列分析结果一致.结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于检测及鉴别基因Ⅰ型与基因Ⅲ型JEV.

关键词：日本脑炎病毒、复合RT-PCR、基因Ⅰ型、基因Ⅲ型、鉴别

所属期刊栏目：44

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：公益性行业农业科研专项201203082

在线出版日期：2014-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：419-424