羊地方性鼻内肿瘤病毒SU基因的克隆与原核表达

摘要：

为了研究羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV) SU蛋白的功能,采用RT-PCR方法从ENTV感染羊鼻内分泌物中扩增获得SU基因片段,将其克隆到pMD19-T Simple载体;测序验证后,再对克隆载体进行EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切并亚克隆到pET-32a上,将重组质粒转化至表达宿主菌Rosetta中进行IPTG诱导表达,对表达产物用SDS-PAGE筛选最适条件.结果显示,表达的重组菌融合蛋白大小约60.14 ku,在IPTG终浓度0.75 mmol/L,37℃诱导5h表达效果最好.表达产物通过Ni柱纯化后可得到纯度较高的目的蛋白.经Western-blot分析,所纯化的蛋白能与兔抗羊ENTV阳性血清进行特异性的免疫印迹反应,证明表达的SU蛋白有较好的反应原性.

关键词：羊地方性鼻内肿瘤病毒、克隆、原核表达、纯化、免疫印迹

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分类号：S852.659.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目IRT0848;科技部科技人员服务企业行动计划项目2009GJF00049

在线出版日期：2013-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1175-1179