猪流行性腹泻病毒N基因的原核表达与鉴定

摘要：

为了克隆和表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的N基因,根据GenBank中登录的PEDV (CV777株)的N基因序列设计1对特异引物,提取阳性临床样品的总RNA,通过RT-PCR方法获得PEDV的N基因.将N基因定向克隆至表达载体pET-28a-His Sumo中,酶切和测序鉴定表明获得了阳性重组表达质粒pET-28a-His-Sumo-N.将阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,并进行IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot对表达的目的蛋白进行分析.SDS-PAGE检测结果表明获得了60.0 ku的表达产物,与目的蛋白大小符合;Western-blot结果显示,纯化后的目的蛋白能与PEDV阳性血清发生特异反应.表明成功对PEDV-N蛋白进行了原核表达,且纯化后的蛋白质具有良好的反应原性.

关键词：猪流行性腹泻病毒、N基因、原核表达、纯化、鉴定

所属期刊栏目：43

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：甘肃省高层次人才科技创新创业扶持行动项目1013JHTA008

在线出版日期：2013-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1152-1156