小反刍兽疫病毒China/Tib/07株V蛋白的原核表达及纯化
为获得小反刍兽疫病毒(PPRV)V基因在大肠杆菌中的表达产物,根据GenBank中China/Tib/07株的V基因序列人工合成了V基因,然后将其克隆至表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-V,经酶切鉴定和测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达和GST亲和树脂柱纯化融合蛋白.SDS-PAGE检测结果显示,使用0.8 mmol/L的IPTG在30℃、130 r/min条件下诱导8h后,分子质量约为58 ku的融合蛋白以可溶性状态大量表达;SDS-PAGE及Western-blot分析表明,用含有1 mmol/L还原性谷胱甘肽的GST洗涤缓冲液洗涤8次并用2 mmol/L的还原性谷胱甘肽洗脱缓冲液洗脱时可获得纯度较高的融合蛋白,且此融合蛋白可被抗GST标签的抗体所特异性识别.结果表明,成功表达并纯化了小反刍兽疫病毒的V蛋白,该项工作为研究其生物学功能积累了资料.
小反刍兽疫病毒、V基因、原核表达、纯化
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S852.659.5(动物医学(兽医学))
甘肃省高层次人才科技创新创业扶持行动项目1013JHTA008;家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题SKLVEB2012KFKTO14
2013-12-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
1140-1145