肉食兽类细小病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR方法的建立与应用

摘要：

为建立检测肉食兽类细小病毒荧光定量PCR方法和探索细小病毒基因组拷贝数与病毒含量之间的相关性,在肉食兽类细小病毒VP2基因区分别设计了1对保守引物和1条TaqMan-MGB标记的水解探针,通过对貉细小病毒(RDPV) LN10-1株VP2基因上的长度为92 bp的保守片段进行PCR扩增,构建标准重组质粒,由已知浓度的重组质粒通过荧光定量PCR体系建立标准曲线,建立了检测肉食兽类细小病毒基因组拷贝数的荧光定量PCR方法.结果显示,该检测方法在3.50×102～3.50×107 copies/μL范围内与C.值呈良好的线性关系(R2可达0.999),最低检测浓度为35.0 copies/μL.通过标准曲线得出RDPVLN10-1株样品的目标片段拷贝数,将拷贝数值与TCID50值进行相关性分析；分析结果显示,基因组拷贝数值与病毒TCID50值之间存在极显著的正相关关系(P＜0.01),血凝效价与病毒TCID50值存在显著的正相关关系(P＜0.05).结果表明,与用血凝效价测定病毒含量的方法相比,用本试验建立的荧光定量PCR技术测得的病毒拷贝数值更能准确地代表活病毒的含量.

关键词：肉食兽类细小病毒、荧光定量PCR、TCID50、血凝效价、相关性分析

所属期刊栏目：43

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：科技部星火计划重点项目2010GA660009;吉林省科技发展计划青年科研基金项目20130522089JH

在线出版日期：2013-11-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：843-849