猪繁殖与呼吸综合征病毒shRNA和GP5及M蛋白重组腺相关病毒的制备

摘要：

为研究新型猪繁殖与呼吸综合征疫苗,采用基因克隆技术将合成的特异性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) RNA干扰寡核苷酸序列克隆至pAAV Helper-Free System中表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子下游,将PRRSV的ORF5、ORF6基因克隆至pAAV-U6-IRES-hrGFP的CMV启动子下游,构建重组质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP-shRNA-ORF5-ORF6；将该质粒与系统中的控制质粒pAAV-RC、辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染293T细胞,包装得到表达PRRSV shRNA、GP5及M蛋白的重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6.原病毒液经分离纯化后,用点杂交法测定的重组病毒的物理效价高达1010 copies/mL.Western-blot检测该重组病毒感染293T细胞后GP5、M蛋白的表达,并通过PRRSV抑制试验检测rAAV-shRNA-ORF5-ORF6的干扰作用.结果显示,成功构建了重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6,并能在体外表达GP5和M蛋白；rAAV-shRNA-ORF5-ORF6转导Marc145细胞后能够抑制PRRSV的复制.表明成功构建了重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6,为新型猪繁殖与呼吸综合征双功能疫苗的研制奠定了基础.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、短发夹RNA、腺相关病毒、GP5蛋白、M蛋白、双功能疫苗

所属期刊栏目：43

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：甘肃省科技支撑计划项目2007GS01349

在线出版日期：2013-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：480-487