新型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株全长cDNA克隆的构建与分析

摘要：

为了获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒株的全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株(EF635006)和经典CH-1a株(AY032626)全基因组序列设计并合成特异引物,进而用RT-PCR分6段扩增了HP-PRRSV弱毒株的全基因组.将扩增的各个cDNA重叠片段分别克隆到pMD20-T载体中,建立了PRRSV弱毒株的初级cDNA克隆,并对基因组cDNA序列进行了测定.根据测序结果,选择特异的酶切位点,将各个亚克隆产物逐段亚克隆入经过改造的低拷贝pOK12载体中,通过引入MluⅠ和EcoRⅠ酶切位点将聚合酶Ⅱ、Ⅰ和T7启动子序列及榔头锤酶基因置于病毒基因组的5’端,引入NotⅠ和Fse Ⅰ将聚合酶Ⅱ、Ⅰ终止子序列及戊型肝炎病毒核酶基因置于病毒基因组的3’端,结果得到了病毒基因组全长cDNA克隆ppAPRRSVOK12.测序结果表明,该毒株基因组全长15 319 bp[不包括poly(A)尾]；全基因序列比对结果显示,该毒株属于北美洲型毒株,与HuN4的同源性高达99.5％.测序及酶切鉴定结果证实,HP-PRRSV弱毒株基因组全长cDNA克隆已构建成功.

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、基因组全长cDNA克隆、感染性分子克隆、序列分析

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：甘肃省高层次人才科技创新创业扶持行动项目1013JHTA008;公益行业专项200903055-04,2008FY130100

在线出版日期：2013-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：458-465