兔出血症病毒与欧洲野兔综合征病毒复合RT-PCR检测方法的建立

摘要：

为建立用于兔出血症病毒（RHDV）和欧洲野兔综合征病毒（EBHSV）诊断鉴别的快速检测方法,根据GenBank中的RHDV和EBHSV基因组序列,设计合成5条特异性引物和9条重叠延伸引物,分别以通过重叠延伸PCR人工合成的EBHSV VP60基因中359bp基因片段构建的重组质粒pGM-T-EBHSV和RHDV RT-PCR产物构建的pGM-T-RHDV为模板,经过反应条件的优化、敏感性试验和特异性试验,初步建立了RHDV和EBHSV的复合RT-PCR检测方法,并对20份临床样品和5份RHDV人工感染样品进行了检测。结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可分别扩增出RHDV和EBHSV的特异性目的片段192bp和335bp,对2种病毒的检测限度均可达到50copies的目的基因片段,兔巴氏杆菌、兔大肠杆菌和沙门氏菌核酸扩增均为阴性。样品检测结果显示,5份人工感染样品的RHDV检出率为100%,20份临床样品的RHDV检测为阴性。

关键词：兔出血症病毒、欧洲野兔综合征病毒、反转录-聚合酶链反应、重叠延伸PCR

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：长江学者和创新团队发展计划创新团队项目;四川农业大学双支计划;博士后培养经费项目;四川省教育厅青年项目

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1165-1170