猪大肠杆菌不耐热肠毒素LTB基因的克隆及原核表达

摘要：

从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌,根据GenBank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)基因序列,设计了1对引物,采用PCR技术扩增LTB的编码基因,得到一条375 bp的片段.将其连入Simple-T载体中,经酶切、PCR及序列测定法进行鉴定.测序正确后,将该基因插入到pET-28a(+)载体中构建原核表达栽体,将此重组质粒转化到Rosetta(DE3)感受态细胞中,并用IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot进行分析.结果显示,LTB基因可以在大肠杆菌中获得表达,表达产物分子质量约为14 ku,与预计的蛋白分子质量大小一致.Western-blot分析表明,该蛋白可以与大肠杆菌免疫血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性,为大肠杆菌亚单位疫苗的研究奠定了基础.

关键词：不耐热肠毒素、LTB基因、原核表达

所属期刊栏目：41

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：河北农业大学校长基金

在线出版日期：2011-06-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：163-166