鸡细胞因子实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

根据鸡IL-6、IL-1β、IFN-γ、TGF-β4 mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经鞭毛蛋白刺激的鸡巨噬细胞HD11总RNA,并反转录成cDNA,建立了实时荧光定量PCR方法.结果显示,融解曲线均呈单一峰;同一份cDNA经过3个相同反应体系的实时荧光定量PCR扩增后,其扩增曲线基本重合.HD11细胞经鞭毛蛋白刺激后,前炎性细胞因子IL-6和IL-1β的相对表达量分别为14.90和29.09,与对照组相比显著升高(P＜0.05);而IFN-γ与抗炎性细胞因子TGF-β4的相对表达量无显著变化(P＞0.05).应用该方法检测了3份沙门菌感染鸡血液样品异嗜白细胞中这4种细胞因子的表达水平,前炎性细胞因子IL-6、IL-1β的相对表达量分别为6.19和2.39,与对照组相比显著升高(P＜0.05);TGF-β4的相对表达量无明显变化(P＞0.05).结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好,为定量检测鸡细胞因子的一种快速、准确的方法.

关键词：实时荧光定量聚合酶链反应、细胞因子、定量检测

所属期刊栏目：40

分类号：Q511;Q503(蛋白质)

资助基金：国家自然科学基金;公益性行业农业科研专项;江苏省自然科学基金;江苏省高等学校"青蓝工程"项目

在线出版日期：2011-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1265-1270