DNA疫苗体外与体内表达及鉴定方法的建立

摘要：

为了确定作为疫苗的质粒DNA能否在真核细胞中表达和探讨其是否有可能和宿主DNA发生整合,基于弓形虫DNA疫苗pcDNA3.1-GRA6建立了鉴定DNA疫苗在真核细胞内表达以及其是否与宿主DNA重组的方法.以黄色荧光蛋白为标记优化DNA疫苗体外转染真核细胞的最佳条件,然后通过RTPCR和Western-blot方法对目的蛋白GRA6的表达进行了鉴定.DNA疫苗免疫小鼠后,在不同时间点用PCR方法检测质粒DNA在体内组织样本中的分布,探讨了质粒DNA是否能与宿主DNA发生整合.结果显示,弓形虫DNA疫苗pcDNA3.1-GRA6在质粒DNA与转染试剂的比例为1:8时体外转染效果最好,RT-PCR和Western-blot方法均证明其可以在真核细胞中表达.免疫后第28天,pcDNA3.1-GRA6免疫组小鼠的脾、肝等组织的基因组DNA样品均可扩增出GRA6基因片段;而免疫后第56天,各组织均未扩增出特异性GRA6基因片段.表明质粒DNA只能短暂存在于体内.因此,DNA疫苗重组质粒体外与体内鉴定方法的建立,为DNA疫苗开发提供了一个较为系统的研究基础.

关键词：DNA疫苗、黄色荧光蛋白、转染、基因组整合

所属期刊栏目：40

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技重大专项2008ZX10004-011

在线出版日期：2011-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1243-1247