副猪嗜血杆菌部分体内诱导基因的筛选

摘要：

用Sau3A I酶切副猪嗜血杆菌(HPS)SC-1株基因组,回收500～2000 bp的片段,并与pRSETa/b/c载体连接,构建了HPS SC-1株基因组表达文库;将攻毒后不同时间的猪血清混合,分别与体外培养的HPS Sel和大肠杆菌BL21的全菌、超声裂解产物及热变性裂解产物进行吸附,用ELISA检测吸附效果,并用Western-blot进一步验证;再用经过吸附的混合血清对HPS SC-1基因组表达文库进行菌落原位免疫杂交筛选;对筛选出来的阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果显示,构建的副猪嗜血杆菌基因组文库库容量为1.2×104CFU;混合血清经过吸附后,D450mm由0.384下降到0.220.Western-blot结果显示,经吸附的血清与HPS SC-1株超声裂解产物无任何条带;通过原位免疫印迹筛选获得5个阳性克隆;阳性克隆测序结果经DNAMAN分析初步推测出5个可能具有生物学意义的开放阅读框,BLAST分析表明,这些序列与GenBank中的副猪嗜血杆菌相应基因的同源性在99%以上,分别涉及副猪嗜血杆菌的酪氨酸磷酸酯酶、异亮氨酰-tRNA合成酶、荚膜多糖输出蛋白及2个假定蛋白.结果表明,应用体内诱导抗原技术从副猪嗜血杆菌SC-1株基因组表达文库中成功筛选出5个阳性克隆,其中部分基因可能与毒力相关.

关键词：副猪嗜血杆菌、基因组表达文库、体内抗原诱导鉴定技术、菌落原位免疫杂交

所属期刊栏目：40

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：教育部”长江学者和创新团队发展计划”项目IRT0848

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：673-679