旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达
根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达.SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性.PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致.测序结果表明,插入片段为1122 bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%.含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5 ku,而且主要以包涵体形式存在.Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原.
旋毛虫、丝氨酸蛋白酶抑制因子、重组蛋白、抗原性
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S852.731(动物医学（兽医学）)
国家”十一五”科技支撑计划项目2007BAD40B03;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项0032007012;甘肃省科技重大专项0702NKDA039;教育部留学回国人员科研启动基金
2010-08-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
470-474
