以番鸭呼肠孤病毒σC表达蛋白为抗原的ELISA检测方法的建立

摘要：

将鸭呼肠孤病毒小外壳σC蛋白编码基因克隆于原核表达载体pET32a上,经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切鉴定及序列分析,获得了重组质粒pET32a-σC,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞后,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,融合蛋白能够与番鸭呼肠孤病毒感染康复鸭血清发生特异反应;以0.15 mmol/L IPTG诱导,5 h后融合蛋白σC表达量可达高峰,分子质量为50 ku;融合蛋白纯化后被用作包被抗原,建立了检测鸭血清中呼肠孤病毒抗体的间接ELISA,经对检测条件优化,最佳包被浓度为5 μg/mL,标准阳性血清的最适稀释倍数为1∶40.用该方法对50份鸭血清样品进行了检测,与琼脂扩散抗体检测法相比,ELISA具有良好的特异性和敏感性.

关键词：番鸭呼肠孤病毒、σC编码基因、原核表达、酶联免疫吸附试验

所属期刊栏目：36

分类号：S852.659.4;R446.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：科技部科研项目2005CB522905

在线出版日期：2006-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：171-176