可控细胞膜孔形成蛋白基因的克隆与表达

摘要：

根据Wood 46株金黄色葡萄球菌α溶血素(α-HL)基因序列设计了引物,用高保真PCR从1800株金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出了0.9 kb的α-HL基因,序列测定结果显示,两菌株α-HL基因的核苷酸序列有6个碱基差异,但仅引起1个氨基酸替换.用PCR分段克隆和定点突变技术将大肠埃希氏菌外膜蛋白A信号肽序列与α-HL编码区融合,并将其第130～134位氨基酸替换为5个连续的组氨酸,获得的融合基因命名为H5基因.将其克隆入pET-30a质粒,用获得的重组质粒pET-H5转化感受态大肠埃希氏菌,获得分泌性表达H5的重组菌.经IPTG诱导后,重组菌表达出分子质量为35 ku的H5蛋白.经镍柱亲和层析纯化的H5对兔红细胞的半数溶血值为180 ng/mL,能使鼠成纤维细胞PA317获得对台盼蓝和海藻糖的通透性,且能被Zn2+抑制.提示,表达的H5蛋白为可控细胞膜孔形成蛋白,能用作真核细胞内玻璃态保存的渗透剂.

关键词：金黄色葡萄球菌、α溶血素基因、突变、原核表达、可控膜孔形成蛋白

所属期刊栏目：34

分类号：S852.611:Q786(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2004-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：18-23