基于定量蛋白质组学研究当归拈痛汤对风湿热痹佐剂性关节炎大鼠的作用机制

摘要：

目的:应用定量蛋白质组学研究当归拈痛汤对风湿热痹佐剂性关节炎(AA)大鼠的作用机制.方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤低、中、高剂量组及甲氨蝶呤(MTX)组,每组10只,大鼠尾根部皮下注射灭活结核分支杆菌佐剂(Mtb)进行AA的造模,人工气候箱干预16 d建立风湿热痹证模型,造模当天开始给药干预,持续干预28d.提取大鼠滑膜组织蛋白质,使用4D非标记定量(4D-LFQ)蛋白质组学研究当归拈痛汤中剂量组与风湿热痹证模型组之间的差异蛋白情况,采用免疫组化及蛋白免疫印迹法(Western blot)验证与线粒体途径细胞凋亡相关的差异蛋白.结果:从滑膜组织中检测出4 756个蛋白质,其中4234个蛋白质包含定量信息.当归拈痛汤与模型组差异蛋白为814个.基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示,当归拈痛汤对风湿热痹证AA大鼠的滑膜蛋白质组确有影响,且差异蛋白集中在对免疫系统的调控、急性炎症的反应和凋亡水平的调节.免疫组织化学与蛋白免疫印迹法验证发现,与模型组比较,当归拈痛汤各剂量组及MTX组滑膜组织中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)及细胞色素C(CytC)蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2的表达水平明显下降(P＜0.05,P＜0.01),剪切型胱天蛋白酶-9(cleaved Caspase-9)/胱天蛋白酶-9(Caspase-9)显著升高(P＜0.01),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)/蛋白激酶B(Akt)明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:当归拈痛汤对风湿热痹证类风湿关节炎的治疗涉及多靶点,其可能通过调节Akt/Bax/Bcl-2通路,促进线粒体途径细胞凋亡,从而发挥其对风湿热痹证类风湿关节炎的防治作用.

关键词：当归拈痛汤、风湿热痹证、类风湿关节炎、蛋白质组学、细胞凋亡

所属期刊栏目：28

分类号：R2-0;R33;R289;R593.22

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;广东省自然科学基金

在线出版日期：2022-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：62-70