宽叶缬草SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选

摘要：

目的:建立宽叶缬草的相关序列扩增多态性(SRAP)-聚合酶链式反应(PCR)反应体系,为宽叶缬草良种选育提供理论和技术基础.方法:采用单因素试验考察Taq Mix用量,Mg2+浓度,模板DNA浓度,Taq DNA聚合酶浓度对宽叶缬草SRAP-PCR扩增结果的影响,以此为基础进行正交试验,优化宽叶缬草SRAP-PCR反应体系,并在最优反应体系条件下筛选可用于宽叶缬草遗传多样性研究的有效引物.结果:单因素实验结果表明Taq Mix用量为8～11 μL时扩增效果较佳;加入低浓度Mg2+可获得较佳扩增效果;中低浓度模板DNA用量可提高扩增效果;加入少量Taq DNA聚合酶可增加扩增结果丰富度.正交实验结果表明各因素对宽叶缬草SRAP-PCR扩增结果的影响程度大小依次为Taq Mix用量＞Taq DNA聚合酶加入量＞Mg2+加入量＞模板DNA用量.适于宽叶缬草的最优反应体系为Taq Mix 11 μL,模板DNA 30 ng,Mg2+ 0.025 mmol·L-1,Taq DNA 1.5 U,正向引物与反向引物各5μmol·L-1,用双蒸水补足体系至20 μL.最优退火温度为36.8 ℃.应用最优体系从88对引物中筛选出17对适用于宽叶缬草SRAP-PCR的条带清晰、多态性较高的有效引物.结论:建立的宽叶缬草SRAP-PCR反应体系稳定性良好,可用于宽叶缬草遗传多样性研究.

关键词：宽叶缬草;相关序列扩增多态性(SRAP);体系优化;引物筛选;正交试验设计

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分类号：R284.2;R289;R22;R2-031;R33(中药学)

资助基金：贵州省教育厅青年科技人才成长项目;大学生创新创业训练计划项目;贵州省发改委工程中心项目;贵州省教育厅高等学校特色重点实验室平台项目

在线出版日期：2021-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：163-171