疏肝补肾毓麟汤调节VDAC2基因甲基化影响弱精症大鼠精子线粒体功能改善精子质量

摘要：

目的:明确疏肝补肾毓麟汤抑制电压依赖性阴离子通道2(VDAC2)基因甲基化,通过环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)通路,调节线粒体功能,提高精子活力的作用机制.方法:雄性SD大鼠40只随机分成空白组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组及左卡尼汀组,每组8只.采用腺嘌呤(0.05 g·kg-1)灌胃14d,复制少弱精症大鼠模型;疏肝补肾毓麟汤组给予疏肝补肾毓麟汤高、低剂量(32.4,8.1g·kg-1)灌胃;左卡尼汀组予以左卡尼汀(0.27 g·kg-1)灌胃.全自动精子分析仪检测精子活力;苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织病理形态学变化;流式细胞法检测精子线粒体膜电位差;免疫荧光法检测睾丸VDAC2的表达:实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测睾丸组织VDAC2mRNA表达;亚硫酸氢盐测序法检测睾丸组织VDAC2基因甲基化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测睾丸组织cAMP表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测睾丸组织PKA蛋白表达.结果:与空白组比较,模型组精子密度及活动率均显著降低(P＜0.01),线粒体膜电位显著增高(P＜0.01),睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白,PKA蛋白,cAMP含量均显著降低(P＜0.01),VDAC2甲基化程度显著增高(P＜0.01);与模型组比较,左卡尼汀组、疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组精子密度及活动率、线粒体膜电位均显著升高(P＜0.01),睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白,PKA蛋白,cAMP含量均显著升高(P＜0.01),VDAC2甲基化程度显著降低(P＜0.01);与左卡尼汀组比较,疏肝补肾毓麟汤低剂量组精子密度及活动率、线粒体膜电位均显著降低(P＜0.01),睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白,PKA蛋白,cAMP含量表达均显著降低(P＜0.01),VDAC2甲基化程度显著升高(P＜0.01).结论:疏肝补肾毓麟汤可能通过抑制VDAC2基因甲基化,增加VDAC2表达,调节cAMP/PKA通路,改变线粒体膜电位增强精子活力.

关键词：弱精症;疏肝补肾毓麟汤;电压依赖性阴离子通道2;甲基化;线粒体膜电位

所属期刊栏目：27

分类号：R2-0;R289;R33;Q954.43+4

资助基金：湖北中医药大学科研团队建设项目;全国中医优秀人才研修项目;武汉市中青年中医名医项目;湖北省卫计委资助项目

在线出版日期：2021-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：72-79