甘草酸通过RNA结合蛋白HuR调控p21表达对IEC-6细胞抗凋亡作用的影响

摘要：

目的:研究甘草酸(GA)通过RNA结合蛋白人类抗原R(HuR)调控p21转录后表达,探讨GA对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/放线菌酮(CHX)诱导的小肠上皮细胞凋亡的抵抗作用机制.方法:采用大鼠小肠隐窝上皮细胞株(IEC-6),实验分空白组,GA(60 μmol· L-1)组,TNF-α+CHX组和GA+TNF-α+CHX组,分别用生物素标记RNA与蛋白结合实验(Biotin pull down)和RNA-免疫共沉淀(RNA IP)分析RNA结合蛋白HuR与p21 mRNA的外源性和内源性结合;构建含p21 3'-UTR-ARE的荧光素酶报告质粒,用双荧光素酶报告基因系统检测HuR对p21的转录后调控影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测HuR及p21 mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HuR及p21蛋白表达水平.采用TNF-α+CHX诱导细胞凋亡,实时细胞功能分析仪检测细胞凋亡,免疫共沉淀(CO-IP)检测p21蛋白与半胱氨酸蛋白酶-3前体蛋白(proCaspase-3)结合.结果:与空白组比较,GA处理后,能升高细胞浆内HuR蛋白的表达(P＜0.05);GA能促进HuR与p21 mRNA 3'-UTR的结合(P＜0.05);GA通过HuR升高了p21 mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),同时增高对荧光素酶报告基因的表达(P＜0.01),沉默HuR后GA对p21 mRNA和蛋白的上调表达作用消失,GA能促进p21与proCaspase-3的结合(P＜0.05),部分降低TNF-α+CHX诱导的IEC-6细胞凋亡.结论:GA能促进HuR向细胞浆内转位,促进HuR与p21 mRNA结合并调节其表达,增高荧光素酶表达活性以促进p21的翻译表达,增高p21与proCaspase-3的结合,从而提高IEC-6细胞的抗调亡能力.

关键词：甘草酸、RNA结合蛋白人类抗原R(HuR)、p21、小肠上皮细胞、凋亡

所属期刊栏目：26

分类号：R2-0;R289;R285

资助基金：国家自然科学基金81473440

在线出版日期：2020-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：85-93