高效提取细胞培养上清外泌体方法的建立

摘要：

目的 建立一种快速、简单且高效提取细胞培养上清中外泌体的方法,以期促进外泌体在临床与疾病治疗中的应用.方法 将羟基(OH)修饰磁珠与高分子化合物Buffer EXD结合,建立新的外泌体提取系统,并使用该系统提取细胞培养上清中的外泌体.通过Western blot法检测外泌体标志蛋白的表达变化;纳米颗粒追踪分析(nanoparticles tracking analysis,NTA)技术检测外泌体的粒径大小和浓度;透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)技术检测外泌体的形态结构.对Buffer EXD系统提取外泌体的方法进行优化(提取pH、Buffer EXD比例、孵育时间、磁珠用量及种类).结合细胞培养和显微拍照技术分析新系统纯化的外泌体对A549细胞增殖的影响.结果 新系统提取的外泌体样品中标志蛋白Alix、CD9和CD81等表达水平较高,而外泌体阴性蛋白Calnexin表达较少;新系统提取的外泌体粒径峰值在100 nm左右,具有茶托状的典型形状.新系统的pH为5.0,Buffer EXD浓度为20％,1.75％的OH磁珠与样品孵育时间为40 min时,提取的外泌体样品中标志蛋白含量最高.新系统提取的外泌体对A549细胞的增殖具有明显的促进作用.结论 以OH修饰的磁珠为介质,结合高分子化合物Buffer EXD,成功建立了一种可快速、简单、高效地从细胞上清中提取结构完整、形态特征明显且具有生物学功能外泌体的新体系.

关键词：外泌体、细胞培养上清、高分子化合物Buffer EXD、磁珠

所属期刊栏目：37

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金;石河子大学高层次人才启动项目

在线出版日期：2024-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：975-982,988