重组人生长激素-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱检测方法的优化及验证
目的 优化重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测方法,并对优化的方法进行验证.方法 利用SEC-HPLC法对rhGH-Fc免疫融合蛋白中多聚体含量进行检测,优化检测条件(盐浓度、流动相pH、流速、柱温及色谱柱型号),观察目的蛋白与聚合体分离的效果.对方法的系统适应性、专属性、线性与范围、精密性、准确性及定量限进行验证.结果 优化后的方法为采用TSK-gelG2000SWxl色谱柱(5 μm,7.8mm× 300 mm)进行测定,流动相50 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.80),检测波长280 nm,进样量100μL,流速0.6 mL/min,柱温45℃.rhGH-Fc免疫融合蛋白与聚合物分离度、理论塔板数、拖尾因子均能满足要求;rhGH-Fc免疫融合蛋白样品与对照品出峰时间一致,GH国家标准品与对照品出峰时间不同,蛋白缓冲液不出峰;rhGH-Fc免疫融合蛋白浓度在0.307～1.842 mg/mL范围内,其峰面积与上样量呈良好的线性关系(R2=0.9994);重复性验证峰面积和纯度的RSD分别为0.7％和0.1％;中间精密性验证的RSD为0.8％;准确性验证的平均回收率为99.1％,RSD为1.9％;定量限为6μg/mL.结论 采用优化后的SEC-HPLC法检测rhGH-Fc免疫融合蛋白多聚体含量,准确性有所提高,柱效与分离度符合《中国药典》四部(2020版)的相关规定,可用于对样品中高分子含量的检测.
尺寸排阻高效液相色谱、重组人生长激素、免疫融合蛋白、多聚体
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R392.3
吉林省重点科技攻关项目20160204034YY
2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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