重组抗SARS-CoV-2 IgA单克隆抗体的优化表达及其初步鉴定
目的 制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)IgA单克隆抗体,对其表达条件进行优化以提高表达量,并初步探讨IgA抗体在抗SARS-CoV-2中的效应.方法 将编码IgA1-F61抗体序列的质粒与聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)转染试剂混合后转染EXPi293F™细胞,瞬时表达抗体蛋白;通过优化重链(heavy chain,He)、轻链(light chain,Lc)、J链(joining chain,Jc)比例、质粒与PEI比例、转染后收获时间确定单体IgA1(monomeric IgA1,mIgA1)-F61 及二聚体IgA 1(dimeric IgA1,dIgA1)-F61 在EXPi293F™细胞中的最佳培养条件以及最佳表达量.将转染后上清经亲和层析纯化后,BCA法测定浓度,SDS-PAGE及体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法分析抗体表达完整性及纯度,假病毒中和试验检测抗体中和活性.结果 当He与Lc比例为1∶2、质粒与PEI比例为1∶3、转染后5d收获上清时,mIgA1-F61最高表达量为123.45 µg/mL,纯化后抗体纯度达95％以上;He∶Lc∶Jc为1∶2∶1时,可获得最大纯度的dIgA1-F61,达90％以上.针对OmicronBA.4/5的假病毒中和试验结果显示,dIgA1-F61呈现优于IgG-F61的中和活性,其最大半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)降低了4倍左右.结论 成功表达了重组抗SARS-CoV-2单克隆抗体mIgA 1-F61和dIgA 1-F61,纯度较高,且dIgA 1在体外展现出优于IgG的中和活性.
严重急性呼吸综合征冠状病毒2、单克隆抗体、单体IgA、二聚体IgA、瞬时表达、优化
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R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家重点研发计划2022YFC0869300
2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1206-1212
