干扰素受体1沉默的人二倍体MRC-5细胞系对水痘-带状疱疹病毒复制的影响

摘要：

目的 通过优化人二倍体细胞系MRC-5降低其干扰素(interferon,IFN)相关基因表达水平,以提高水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)在该细胞系中的复制水平,并提高VZV疫苗产量.方法 通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建 IFN 受体 1(interferon receptor 1,IFNAR1)沉默的 MRC-5 细胞系(MRC-5IFNAR1-).采用 qRT-PCR法检测MRC-51FNAR1细胞系IFNAR1 mRNA相对表达量,同时检测VZV感染后IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量,评价基因沉默效果.通过沉默位点的基因测序进一步鉴定基因突变序列.采用qRT-PCR法和空斑形成单位(plaque formation unit,PFU)试验,对比VZV感染后168 h病毒在MRC-5和MRC-5IFNAR1-细胞系中的复制情况,评价MRC-5IFNAR1-细胞系对VZV复制的影响.结果 MRC-5IFNAR1-细胞系生长状态与MRC-5细胞一致,IFNAR1mRNA相对表达量降低73％;VZV感染后MRC-5IFNARl-细胞系中IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量比MRC-5细胞分别降低了 61％和90％;VZV感染后168 h,病毒DNA复制水平增加5.7倍,病毒滴度增加4倍.结论 成功建立了 MRC-5IFNAR1.细胞系,可作为增加基于人二倍体细胞疫苗产量的潜在方案,为扩大VZV疫苗生产提供了参考.

关键词：水痘-带状疱疹病毒、人二倍体MRC-5细胞、干扰素应答、基因沉默

所属期刊栏目：36

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;吉林省科技发展计划;内蒙古自治区科技攻关计划

在线出版日期：2023-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：21-25,31