十二指肠贾第虫端粒酶逆转录酶RNA结合域TRBD互作蛋白的筛选及验证
目的 利用酵母双杂交系统筛选十二指肠贾第虫端粒酶逆转录酶RNA结合域TRBD的互作蛋白,并验证其是否存在互作关系.方法 通过分子克隆技术构建诱饵质粒pGBKT7-TRBD),应用酵母双杂交技术将诱饵质粒与贾第虫酵母双杂交cDNA质粒文库共转化至Y2H Gold酵母感受态细胞中,通过不同营养缺陷型培养基筛选杂交成功的菌落.对筛选出的阳性克隆进行回返试验,并通过双分子荧光互补试验及GST-Pull down试验进一步验证二者存在的互作关系.结果 诱饵质粒pGBKT7-TRBD经双酶切和测序鉴定证明构建正确.该诱饵质粒在贾第虫酵母双杂交 cDNA 质粒文库中初步筛选得到 5 个阳性克隆,即 histone acetyltransferase type B subunit 2、bZIP family protein、WD-repeat protein、NHL repeat-containing protein、heat shock protein 90(Hsp90),经回返验证、双分子荧光互补和GST-Pull down试验确定阳性基因Hsp90与TRBD存在互作关系.结论 利用酵母双杂交技术成功筛选出与十二指肠贾第虫端粒酶TRBD存在相互作用的Hsp90,为进一步探索贾第虫端粒酶调控机制奠定了基础.
十二指肠贾第虫、端粒酶逆转录酶、TRBD、酵母双杂交、蛋白相互作用
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S852.72(动物医学（兽医学）)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;吉林省科技发展计划项目
2022-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
575-582
