IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达
目的 构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达.方法 以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体GV102中,构建重组质粒IQGAP1-shRNA,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆测序鉴定.用脂质体2000介导IQGAP1-shRNA转染KYSE150细胞作为IQGAP1-shRNA干扰组,同时设转染载体GV102为对照组,RT-PCR及Western blot法检测IQGAP1基因的干扰效果.结果 经测序鉴定,重组质粒IQGAP1-shRNA构建正确.IQGAP1-shRNA干扰组及对照组转染KYSE150细胞均可见绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),两组转染效率分别为(76±5.780)％和(83±3.851)％.IQGAP1-shRNA干扰组IQGAP1 mRNA转录水平和蛋白表达水平与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.001),表达抑制率分别为(82±2.424)％及(77±2.791)％.结论 成功构建了IQGAP1-shRNA真核表达质粒,能特异性降低食管癌KYSE150细胞中IQGAP1基因的表达,为进一步研究IQGAP1基因在食管癌中的功能及靶向治疗作用奠定了基础.
IQ结构域的GTP酶激活蛋白1、短发卡RNA、RNA干扰、重组质粒、食管癌
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R735.1(肿瘤学)
国家自然科学基金81372676;山西省自然科学基金201601D011130
2019-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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