促黄体激素释放激素-TAT-p53融合蛋白制备及其对肿瘤细胞增殖作用的影响
目的 制备促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)-TAT-p53融合蛋白,探讨其抗肿瘤作用.方法 以重组质粒pET28a-p53为模板,经PCR扩增目的基因,双酶切,克隆至原核表达载体pET20b中,构建重组表达质粒pET20b-LHRH-TAT-p53,并在E coli中IPTG诱导表达,经金属螯合层析、DEAE弱阴离子交换层析纯化目的蛋白.取对数生长期的HeLa、BGC及MDCK细胞进行细胞活性试验,检测pET28a-p53蛋白活性.结果 经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET20b-LHRH-TAT-p53构建正确;融合蛋白相对分子质量约54000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白55％;HeLa及BGC细胞加入纯化复性的重组蛋白后,细胞变圆、色暗、折光性变差,甚至裂解死亡,细胞死亡数增加,而MDCK细胞无变化;一定浓度范围内(25～120 μg/mL)蛋白对HeLa及BGC细胞有明显的抑制作用.结论 成功制备了LHRH-TAT-p53融合蛋白,该蛋白具有生物活性,对肿瘤细胞有杀伤作用.本研究为下一步制备靶向LHRH的肿瘤治疗药物提供了参考.
促黄体激素释放激素、TAT蛋白、p53基因、肿瘤增殖
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R73-36+2(肿瘤学)
国家重点研发计划项目2016YFD0501002;国家自然科学基金青年科学基金项目81703546;安徽省自然科学基金青年科学基金项目1808085QH265
2019-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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848-852
