抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体CHO工程细胞株的构建、筛选及表达

摘要：

目的 构建抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化单克隆抗体CHO工程细胞株,并进行筛选及表达.方法 将抗HER2抗体重链基因Fd及轻链基因VL分别克隆至同一质粒pRH上,将构建正确的重组表达质粒命名为pHER2.通过脂质体法将pHER2转染至二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型CHO细胞(CHO-DG44)中,筛选稳定表达的工程细胞株,进行ELISA及SDS-PAGE检测.同时对抗HER2抗体高表达细胞株进行batch模拟试验.结果 从近10000株克隆中筛选获得3株备选细胞株,命名为H6、H7和H9.细胞株培养上清表达的抗体仅能与重组HER2发生特异性结合;SDS-PAGE检测结果表明,于相对分子质量50 000和25 000处可见重链和轻链的目的蛋白条带.H6、H7和H9细胞株在简单的batch悬浮培养条件下周期约为1周,抗体水平随培养时间的延长而逐渐升高,H9细胞株表达水平最高,为0.52 mg/ml.结论 本研究筛选获得的工程细胞株H9具有较高的抗HER2单克隆抗体水平,为靶向治疗HER2过表达的乳腺癌和胃癌等恶性肿瘤奠定了基础.

关键词：人表皮生长因子受体2、单克隆抗体、中国仓鼠卵巢细胞

所属期刊栏目：29

分类号：Q786;R392-33(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1056-1059