结核分枝杆菌热休克蛋白基因真核表达载体的构建及表达

摘要：

目的 构建结核分枝杆菌热休克蛋白X(heat shock protein X,HspX)基因与EGFP融合基因的真核表达载体pEGFP-N 1-HspX,并在小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7中表达.方法 以结核分枝杆菌(H37Rv)基因组DNA为模板,PCR扩增HspX基因,定向插入至质粒pEGFP-N1的多克隆位点,经酶切及测序鉴定正确后,将质粒pEGFP-N l-HspX转染RAW264.7细胞,荧光显微镜下观察GFP的表达,Real-time PCR及Westem blot法鉴定HspX基因的表达.结果 质粒pEGFP-N 1-HspX经酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒pEGFP-N 1-HspX转染24 h后,荧光显微镜下可见GFP表达,表达的重组融合蛋白Flag-HspX相对分子质量约43 000;转染组细胞中HspX基因mRNA水平明显高于空载体组(P＜0.01).结论 成功构建了pEGFP-N 1-HspX融合基因真核表达载体,并在RAW264.7细胞中获得表达.

关键词：结核分枝杆菌、热休克蛋白、基因、真核表达

所属期刊栏目：29

分类号：R378.91+1;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1043-1046