荧光定量PCR方法在脊髓灰质炎病毒突变分析中的应用
目的 建立检测脊髓灰质炎病毒突变比例的荧光定量PCR方法,并进行验证及初步应用.方法 分别建立检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒突变株和非突变株的荧光定量PCR方法,并进行特异性、重复性和灵敏度验证.通过Ct值计算样品的突变比例(revertant proportion,RP),并进行准确性和重复性验证.采用建立的荧光定量PCR方法检测脊髓灰质炎病毒减毒株的突变比例.结果 建立的检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒突变株和非突变株的荧光定量PCR方法能够特异性扩增相应基因片段;重复性试验Ct值的变异系数(CV)为0.085％～5.564％;灵敏度为1×10-7～1×10-6 ng,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型非突变荧光定量PCR可分别检测到含量约0.084 3、0.029 2和0.266 7 CCID50的病毒.荧光定量PCR测定RP的方法经验证发现,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型混合质粒对照的RP检测值与理论值的差异较小,分别为0.0409±0.037 4、0.008 8±0.034 3和-0.029 6±0.026 8.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎减毒株的RP分别为0.001 0、0.0020和0.001 7.结论 荧光定量PCR分析脊髓灰质炎病毒突变比例的方法,特异性、重复性及准确性均较好,并具有较高的灵敏度,可用于实验室内部对脊髓灰质炎病毒的突变比例测定,并可能成为脊髓灰质炎病毒体内或体外神经毒力评价的替代方法.
脊髓灰质炎病毒、疫苗、荧光定量PCR、突变比例
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R373.2+2;Q789(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
科技部863计划2012AA02A401;国药新产品基金2013SW22;重大新药创制2013ZX09402302;北京市科委基金资助Z131100006513007.
2015-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1579-1587,1594
